OBJECTIVE: To develop a solid-phase enzyme immunoassay (ELISA) for genus-specific immunoglobulin G (IgG) determination with leptospirosis and to evaluate the ELISA in different stages of the disease. METHODS: A total of 1 077 serum samples from 812 patients with suspected leptospirosis were analyzed. The samples had come from diagnoses done in the laboratory of the National Institute of Respiratory Diseases (Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias), in the city of Santa Fe, Argentina, between 1999 and 2005. Included in the study were 182 confirmed cases (267 samples), 167 negative cases (293 samples), and 40 probable cases (60 samples) (based on case definitions based on the results from the microscopic agglutination test (MAT), leukocyte counts, and neutrophilia values). Each sample was classified, according to the days of the natural history of disease, into one of three stages: first (< 10 days), second (10-25 days), or third (> 25 days). The antigen used in the ELISA was an extract of a mixture of pyrogenes and tarassovi serovars cultivated in a liquid medium, treated with ultrasound, and immobilized by adsorption on polystyrene plates. As a secondary antibody, a peroxidase-conjugated goat anti-human IgG monoclonal antibody was used. The cutoff value, sensitivity, and specificity of the ELISA were determined using the definitions of confirmed cases and of negatives cases as the standard. In order to determine the optimal cutoff value, the area under the receiver operating characteristic curve was calculated. RESULTS: The sensitivity of the evaluated test was much higher in the second stage (93.2%) than in either the first stage (68.1%) or the third stage (78.8%). The specificity increased gradually from 96.3% in the first stage to 100% in the third stage. CONCLUSIONS: Our results indicate that this ELISA test can be a very useful complement to the MAT for the diagnosis of leptospirosis in all the stages and, in particular, in order to diagnose acute disease sooner.

OBJETIVO: Desarrollar un enzimoinmunoensayo en fase sólida (ELISA) para la determinación de inmunoglobulinas G (IgG) (específico de género) y evaluarlo en diferentes etapas de la enfermedad. MÉTODOS: Se analizaron 1 077 muestras séricas de 812 pacientes con sospecha de leptospirosis derivadas al laboratorio del Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias (INER) de la ciudad de Santa Fe, Argentina, entre 1999 y 2005. A partir de un criterio de definición de casos basado en los resultados de la microaglutinación (MAT) y del recuento de leucocitos, y de los valores de neutrofilia, se incluyeron en el estudio 182 casos confirmados (267 muestras), 167 casos negativos (293 muestras) y 40 casos probables (60 muestras). Cada muestra se clasificó según el tiempo de evolución de la enfermedad en tres etapas: primera (< 10 días), segunda (10-25 días) y tercera (> 25 días). En el ELISA, se utilizó como antígeno un extracto de una mezcla de las serovariedades Pyrogenes y Tarassovi cultivadas en medio líquido, tratado con ultrasonidos e inmovilizado por adsorción en placas de poliestireno. Como anticuerpo secundario se empleó un anticuerpo monoclonal de cabra anti-IgG humana conjugado con peroxidasa. El valor de corte, la sensibilidad y la especificidad del ELISA se determinaron utilizando como patrón la definición de casos. Para determinar el valor de corte óptimo se calculó el área bajo la curva de eficacia diagnóstica (curva ROC). RESULTADOS: La sensibilidad de la prueba evaluada aumentó considerablemente en la segunda etapa (93,2%), con respecto a la primera (68,1%), y descendió en la tercera (78,8%). La especificidad aumentó gradualmente desde el 96,3% en la primera etapa hasta el 100% en la tercera. CONCLUSIONES: Los resultados obtenidos indican que esta prueba de ELISA puede ser de gran utilidad como complemento de la MAT para el diagnóstico de la leptospirosis en todas las etapas y, en particular, para adelantar el diagnóstico de la enfermedad aguda.

In March-April 1998 in a neighborhood in the city of Santa Fe, Argentina, there was an outbreak of an acute disease characterized by fever, headaches, and intense myalgias. This article presents the studies surrounding this outbreak and the attempts to identify the source and the mode of transmission. The epidemiological, serological, and clinical findings indicated that the causative agent was Leptospira interrogans. As a screening test, macroscopic agglutination with heat-resistant antigen was applied, followed by the ELISA test, and, as a confirmatory test, microscopic agglutination for 10 serotypes of L. interrogans. The study covered 32 persons, 8 dogs, and 8 water samples. Among the 32 persons, 12 cases were confirmed, 2 were suspicious, and 18 were negative. Six dogs were found to be infected, and motile spirochetes were found in the water samples. The human sera reacted with the ballum, canicola, icterohaemorrhagiae, and pyrogenes serotypes; the canine sera reacted with the ballum, canicola, and pomona serotypes. The coagglutination found in all the confirmed cases indicates that they were acute cases of leptospirosis, but it was impossible to identify the causal serotype. Except for the index case, the disease was not recognized clinically. Several facts suggest that the outbreak was caused by rain that had flooded the study area. The results of this study emphasize the need for active surveillance of leptospirosis when there are floods and other natural disasters.

En marzo-abril de 1998 se identificó en un barrio de la ciudad de Santa Fe (Argentina) un brote de una enfermedad aguda caracterizada por fiebre, cefaleas y mialgias intensas. Se presentan los estudios realizados en relación con este brote y los intentos de identificación de la fuente y del modo de transmisión. Los hallazgos epidemiológicos, serológicos y clínicos indicaron que el agente causal fue Leptospira interrogans. Como prueba de tamizaje se aplicó la técnica de aglutinación macroscópica con antígeno termorresistente, seguida de la prueba de ELISA y, como prueba de confirmación, la aglutinación microscópica frente a 10 serovariedades de L. interrogans. Se estudiaron 32 individuos, 8 perros y 8 muestras de agua. Se registraron 12 casos confirmados, 2 probables y 18 negativos. En seis perros se demostró la existencia de infección y en las muestras de agua se detectó la presencia de espiroquetas móviles. Los sueros humanos reaccionaron con las serovariedades ballum, canicola, icterohaemorrhagiae y pyrogenes, y los caninos con ballum, canicola y pomona. La coaglutinación observada en todos los casos confirmados indica que se trató de casos agudos de leptospirosis, pero no permite identificar la serovariedad causal. Salvo en el caso índice, no se reconoció clínicamente la enfermedad. Varios hechos sugieren que la causa del brote fue la inundación pluvial de la zona estudiada. Los resultados de este estudio resaltan la necesidad de una vigilancia activa de la leptospirosis ante desastres naturales como las inundaciones.